GFP-CERTIFIED^® 細胞凋亡/壞死檢測試劑盒

GFP-CERTIFIED^® Apoptosis/Necrosis detection kit

可進行區(qū)分正常細胞、早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞和壞死細胞的多重檢測，可與 GFP 和其他綠色熒光探針兼容。

●　可以兼容 GFP 和其他綠色熒光探針

●　容易區(qū)分正常細胞、早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞和壞死細胞

●　已根據(jù)熒光顯微鏡和流式細胞儀等應用進行過優(yōu)化

●　適用于死亡途徑分析及藥物、毒素研究

從凋亡到壞死的過渡是一個松散定義的連續(xù)體。質(zhì)膜細胞外表面上磷脂酰siansuan（PS）的暴露仍是早期細胞凋亡的共同標志。這時候在Ca²⁺存在下，磷脂結(jié)合蛋白例如 Annexin V 與 PS 具有親和力。由于 Annexin V 不具有細胞滲透性，所以這種胞外PS的結(jié)合是早期凋亡細胞對具有選擇性的。

同樣，質(zhì)膜完整性的喪失，如不具有膜滲透性DNA嵌入染料若能標記出細胞核，則是表明晚期細胞凋亡和壞死的直接方法?？紤]到Annexin V通常與熒光素（又稱FITC）偶聯(lián)，檢測綠色熒光蛋白（GFP）表達細胞中的凋亡時可能會出現(xiàn)問題。以上兩個熒光團的發(fā)射圖譜會發(fā)生光譜重疊，使信號之間的區(qū)分變得困難或不可能，從而損害了總體上的數(shù)據(jù)質(zhì)量。GFP-CERTIFIED^® 細胞凋亡/壞死檢測系統(tǒng)專為表達GFP的細胞系以及表達藍色或青色熒光蛋白（BFP、CFPs）的細胞而設(shè)計，同時也可以應用于不帶熒光蛋白的細胞的凋亡和壞死的細胞。另外，本試劑盒適合用于活細胞或結(jié)合了探針（如標記抗體、或與熒光素或xiangdousu顯示相似光譜特性的其他熒光偶聯(lián)物）的細胞。本試劑盒包含了用于確定細胞凋亡及壞死的早期和晚期階段中所需的全部試劑。Annexin V -EnzoGold（增強型Cyanine-3）偶聯(lián)物能夠檢測不同于熒光素或GFP的細胞凋亡。壞死檢測試劑（紅色）類似于發(fā)出紅色的染料7-AAD，可促進晚期細胞凋亡和壞死檢測。本試劑盒還包含了可用作陽性對照的凋亡誘導劑（Staurosporine）。檢測試劑可單獨使用或分別與其他單獨或多重應用組合使用。本試劑盒還可以通過流式細胞儀和熒光/共焦顯微鏡提供快速、準確的檢查結(jié)果。

GFP、Annexin V-Cyanine 3 偶聯(lián)物和壞死檢測試劑（紅色）的激發(fā)（陰影線）和發(fā)光（固體）光譜。

三種染料都可以輕易地被 488 nm 激光源激發(fā)。所有熒光團之間的發(fā)射峰值容易區(qū)分。

GFP-CERTIFIED^® 細胞凋亡/壞死檢測試劑盒（ENZ-51002）

流式細胞儀。用0.2％DMSO（panel A）模擬誘導 Jurkat 細胞，或用 2 μM 星形孢菌素（panel B）在37°C下誘導 Jurkat 細胞４h。經(jīng)過處理后，在含有 Annexin V-Cyanine 3 和壞死檢測試劑（紅色；一種遠紅色發(fā)光的 DNA 嵌入染料）的緩沖液中孵育細胞，然后用 488 nm 激光的流式細胞儀進行分析，用 FL2（細胞凋亡）和 FL3（壞死）通道進行熒光檢測。

模擬誘導的細胞凋亡和壞死主要呈陰性。處理４h 后，會出現(xiàn)３種細胞群：

（1）可以存活且不凋亡、不壞死的細胞（Annexin V-Cyanine 3、壞死檢測試劑呈陰性）；

（2）正在經(jīng)歷凋亡的細胞（Annexin V-Cyanine 3 呈陽性和 NDR 呈陰性）；

（3）處于晚期凋亡和早期壞死的細胞（Annexin V-Cyanine 3 和壞死檢測試劑呈陽性）。

用 2.5 µM 星形孢菌素刺激 Jurkat 細胞 0-6 h。使用 Jurkat 懸浮細胞的流式細胞儀結(jié)果表現(xiàn)為早期凋亡（Annexin V-EnzoGold）和晚期凋亡/壞死（Annexin V-EnzoGold 和壞死染色）。

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